• 普拉康唑中四种光学异构体的HL法测定 不要轻易放弃。学习成长的路上,我们长路漫漫,只因学无止境。


    [摘要]目的建立同时测定普拉康唑中种光学异构体含量的方法。方法采用高效液相色谱法对普拉康唑中种光学异构体的含量进行测定。色谱柱为DielhilI手性柱流动相为正己烷∶乙醇(∶),流速为mL/min检测波长为nm柱温为℃。结果种光学异构体间分离度均大于,检测质量浓度线性范围均为~μ/mL(≥),方法回收率≥%,SD<%(n=),检测限为μ/mL,批普拉康唑样品中异构体的含量分别为批号:%、%、%、%批号:%、%、%、%批号:%、%、%、%。结论建立的方法准确、快速,实现了对普拉康唑光学异构体杂质的有效控制。

    [stt]OjetiveToestlishthemethododetemintionoindsoenntiomesinmionzoleMethodsHLmethodwsdotedtodeteminetheontentoindsoenntiomesinmionzoleThedetemintionwssetedonDielhilIThemoilehsewsonsistedohexneethnol(∶)tlowteomL/minndtheolumntemetuet℃ThedetetionwvelenthwsnmesultsTheesolutionoindsoenntiomesweeetethnThelineneothemweeμ/mL(≥,n=)withneoveyte≥%(SD<%,n=)Thedetetionlimitswsμ/mLTheenntiomeontentomionzolewsthNo:%,%,%,%thNo:%,%,%,%thNo:%,%,%,%onlusionThemethodisute,idndsuitleoqulityontoloenntiomesinmionzole

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    普拉康唑(mionzole,),化学名为({[({(S,)(,二氟苯基)[(H,,三唑基)甲基],二氧戊环基}甲氧基)苯基]哌嗪基}苯基)(丙烷基)咪唑烷酮烷,是由比利时ieTheeutis公司开发研制的一种新型三唑类抗真菌药,目前在欧盟尚处于Ⅱ期临床试验阶段,尚未上市,具有疗效确切,耐受性好,不良反应程度较轻的特点,是一种较有发展前途的广谱抗真菌药。该药的抗菌机制除了抑制麦角固醇合成,还涉及到降低马拉色菌对角质细胞的黏附及与机体固有免疫的协同作用。普拉康唑在抗念珠菌和马拉色菌方面具有比较明显的优势,在相同剂量下表现出较伊曲康唑更强的抗菌能力。该药的前体分子是伊曲康唑,两者都对表皮癣菌、酵母菌和其他许多真菌有明显的抗菌作用。普拉康唑作为口服药物用于治疗浅部真菌感染,如皮肤、甲、口腔外阴黏膜疗效明显,不良反应少且程度轻。不足之处是临床应用范围不如伊曲康唑广,目前仅用于治疗浅部真菌感染[]。

    普拉康唑结构中有个手性碳,在合成过程中可能会产生种光学异构体,除了目标化合物普拉康唑外,还有(,S)构型的、(,)构型的和(S,S)构型的D。化学结构见图。按照研发立体异构体新药的相关技术要求[],有必要建立一套完善的分析方法对普拉康唑的光学异构体杂质进行质量控制和产品质量评价。由于普拉康唑还未上市,分析方法尚未公开,为此,本研究根据《中国药典》年版二部附录VD的相关要求[],建立了一套HL法来监控种光学异构体。该色谱条件满足对普拉康唑光学异构体的分离要求,方法准确、快速,重现性好,可为普拉康唑原料药及制剂质量分析等工作提供依据。

    仪器与试药

    型高效液相色谱仪(美国安捷伦)。对照品(含量%,批号)、(含量%,批号)、(含量%,批号)和D(含量%,批号),均为重庆涵虚阁制药技术开发有限公司(以下简称“本公司”)合成、精制、标定(以峰面积归一化法计主峰纯度)普拉康唑样品(本公司自制,批号、、)正己烷、乙醇均为色谱纯,其他试剂为分析纯。方法与结果

    溶液配制

    对照品溶液:分别精密称取普拉康唑对照品~D各约m,各置于mL量瓶中,加流动相溶解并定容至刻度,摇匀,作为浓度为μ/mL的对照品溶液。

    混合对照品溶液:将种异构体对照品溶液按∶∶∶的比例混合,作为浓度为μ/mL的混合对照品溶液。

    供试品溶液:精密称取普拉康唑样品m,置于mL量瓶中,加流动相溶解并定容至刻度,摇匀,作为浓度为m/mL的供试品溶液。

    色谱条件

    分别将~D对照品溶液在~nm进行扫描,各异构体均在nm处有较强吸收,故选定检测波长为nm。色谱柱DielhilI手性柱(mm×mm,μm)流动相正己烷∶乙醇(∶)流速mL/min检测波长nm柱温℃进样量μL。

    系统适用性试验

    取普拉康唑~D对照品溶液及其混合对照品溶液,分别进样测定,结果表明,~D的保留时间分别为、、、min,普拉康唑及其光学异构体基线达到完全分离,理论板数均大于,分威尼斯人在线官方信誉好,各种充值返水。澳门威尼斯人投注有着非凡的创意与想法,就是为了给玩家带来极具特色和魅力的博彩体验,威尼斯人官方在线带给您最奢华游戏盛宴,威尼斯人在线官方让玩家一站式玩尽各种老虎机游戏,威尼斯人在线官方是高端人士的选择.离度分别为、、,拖尾因子均小于,溶剂峰不干扰测定。色谱图见图。

    线性试验

    分别精密称取~D异构体对照品适量,加流动相溶解并摇匀稀释,配制成约、、、、、、、μ/mL的系列浓度溶液,进样测定,以峰面积对浓度作图,进行线性回归,分别得到异构体、异构体、异构体和异构体D的回归方程,结果见表。~D均在~μ/mL浓度范围内线性关系良好,最低检测限(LLOD)为μ/mL,最低定量限(LLOQ)为μ/mL。

    回收率试验

    按“”项下方法,精密称取已知种异构体含量的供试品各份,分别加入含种异构体为高、中、低个质量浓度的对照品溶液各份,作为回收率试验溶液,依法分析,计算回收率。普拉康唑种异构体、、、D的回收率。结果SD均小于%,表明本方法回收率良好。见表。

    精密度和稳定性试验

    取“”项下的混合对照品溶液和供试品溶液,分别连续进样次,记录色谱图。结果SD均小于%(n=),表明本方法精密度良好。

    分别取上述混合对照品溶液和供试品溶液,于室温放置,分别于、、、、h进样测定,记录色谱图。结果~D的峰面积在h内的SD均小于%(n=),表明混合对照品溶液室温放置h稳定。

    耐用性实验

    分别采用不同实验人员,不同温度,不同比例的流动相进行测定,分离效果均符合要求,分离度大于,可以用于普拉康唑光学异构体的分离测定。

    样品测定

    取样品适量,按“”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液,分别进样测定,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与各异构体保留时间相同的杂质峰,按外标法以峰面积计算各异构体的含量。见表。

    讨论

    色谱柱的选择

    本研究在色谱条件摸索试验中先后测试了不同的手性色谱柱,包括蛋白质型、手性多聚物型、μm硅胶表面共价键合纤维素三(,二氯苯基氨基)甲酸酯型(DielhilI)等。结果表明,蛋白质型手性色谱柱威尼斯人在线官方信誉好,各种充值返水。澳门威尼斯人投注有着非凡的创意与想法,就是为了给玩家带来极具特色和魅力的博彩体验,威尼斯人官方在线带给您最奢华游戏盛宴,威尼斯人在线官方让玩家一站式玩尽各种老虎机游戏,威尼斯人在线官方是高端人士的选择.对种光学异构体难以实现基线分离,分离度小于手性多聚物型色谱柱可以满足基线分离种光学异构体,但是如果异构体和分离度要大于以上,则异构体的出峰时间将超过min,且峰形较宽,不能快速、准确地进行定量测定而DielhilI手性色谱柱分离,普拉康唑种光学异构体的分离度均大于,种手性异构体色谱峰的拖尾因子均小于。出峰时间在min以内,所以最终选择DielhilI手性色谱柱测定普拉康唑种光学异构体。

    流动相的选择

    以DielhilI手性色谱柱,先后筛选了正己烷乙醇和正己烷异丙醇系统。结果表明,使用正己烷乙醇系统时,色谱峰形较差,拖尾严重正己烷异丙醇系统则可以实现良好的分离。通过调整一系列不同比例的正己烷异丙醇流动相,最终选择以正己烷异丙醇(∶)为流动相,可以显著地提高分离度和理论塔板数,优化色谱峰的柱效、分离度及出峰时间。

    流速及柱温的选择

    本研究还考察了仪器的流速及柱温对异构体分离度的影响,结果表明,改变流速和柱温对异构体的分离影响较小,综合考虑,选择流速为mL/min,柱温℃,试验表明此条件下普拉康唑种异构体能在较短的时间内达到基线分离,符合测定要求。

    综上所述,本研究先后测试了不同的手性色谱柱、不同的流动相系统对普拉康唑种光学异构体进行了色谱条件的摸索与验证,确定了同时准确、快速测定种光学异构体含量的HL方法。本研究成功地将个光学异构体与普拉康唑进行较好地分离。通过验证试验证明该方法分离度好、精密度高,各异构体在此条件下呈良好线性,可以用于普拉康唑异构体的检测与质量控制。


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